Molecular biologikoaren ikerketa metodo eta bere erabilera

Molecular biologikoaren ikerketa metodo jolastu medikuntza modernoaren, auzitegiko zientzia, eta biologia paper garrantzitsua. DNA eta RNA azterketan aurrerapen esker, pertsona organismoa genoma kausazio agente arakatzeko zehaztu, nahi den azido nukleikoak aitortu azido, etab nahasketa bat gai da

Molecular-biologikoa metodoak. Zer da?

Back zientzialari 70-80s izan zen lehen argitu giza genoma. Ekitaldi hau eman bultzada ingeniaritza genetikoaren eta biologia molekularreko garapenean. DNA eta RNA propietate azterlana ekarri du dela orain posible azido nukleikoak horiek erabiltzeko gaixotasunaren diagnostikoa, azterketa gene helburua da.

DNA eta RNA prestatzea

Molecular biologiko diagnosi metodoak askotan honetan: behar material hasita Azido nukleikoak. Hainbat modu daude organismo bizi-zelulak substantzia horiek hautatzeko. Bakoitzak bere abantailak eta desabantailak ditu, eta kontuan hartu behar denean azido nukleikoak isolatzea forma purua metodo bat aukeratzeko.

1. DNA prestatzea Marmur arabera. metodoa alkohola substantzien nahasketa tratatzeko osatzen dute, DNA hutsa ondorioz egozten. Metodo honen arazotxo korrosiboak substantzia, fenola eta kloroformo erabilera da.

2. DNA boom on isolatzea. Substantzia nagusiak hemen erabiltzen dena - guanidine thiocyanate (GuSCN) da. metaketa sustatzen da azido deoxyribonucleic substratu espezializatutako, bertatik daitezke gerora buffer berezi baten bidez bildutako orrian. Hala GuSCN - TCP inhibitzailea da, eta nahiz eta horren zati txiki bat lortzen DNA metatzen du polimerasaren kate erreakzioa, eta hori oso garrantzitsua denean azido nukleikoak lan egiteko ikastaroa eragina izan dezake.

3. ezpurutasunak Euriak. metodoa molekulak horretan beraiek ez dira metatzen acid dehoksiribonukleinovoy eta ezpurutasunak aurrekoen desberdina. Horretarako, erabili ion trukagailuak du. Desabantaila, substantzia guztiak ez direla finkatu daiteke.

4. Mass emanaldia. Metodo honek kasuetan erabiltzen da, ez duzu behar DNA molekularen egitura, eta beharra estatistika batzuk lortzeko informazio zehatza izatea. Arrazoia da azido nukleikoak egitura hondatuta egon daiteke garbitzaileen, batez alkalies manipulazioa.

ikerketa-metodoak sailkapena

Ikerketa metodoak molekularreko-biologiko guztiak dira hiru talde handitan banatzen dira:

1. anplifikazioa (entzimak pluraltasuna erabiliz). Horretan sartzen PCR - polimerasaren kate erreakzioa, zein paper garrantzitsua du diagnostiko metodo askotan.

2. Neamplifikatsionnye. metodoak talde hau zuzenean lotuta dago azido nukleikoen nahaste lanarekin. Adibideak 3 mota blots dira, in situ hibridazioa, etab

3. metodoak oinarritutako zunda molekula, zein DNA edo RNA zunda jakin bati lotzen seinalea aitortzeko orrian. Adibidea - Hibridazio sistemaren hybride Capture System irtenbidea (HC2).

Hori biologiko molekularreko ikerketa-metodoak erabil daitezke Entzimak

Asko molekularreko diagnosi-teknikak entzimen zabal erabilera inplikatzeko. Jarraian erabiltzen dira gehienetan:

1. Debeku entzima - "moztu" DNA beharrezko piezak den molekula.

2. DNA polimerasa - bikoitza lehorreratutako deoxyribonucleic acid molekula bat laburbiltzen.

3. Alderantzizko transkriptasa (alderantzizko transkriptasa) - DNA sintetizatzeko RNA txantiloi bat erabili.

4. DNA ligase - da nukleotido arteko phosphodiester bonoak eraketa erantzule.

5. exonuclease - nukleotido kentzen amaieran azido deoxyribonucleic molekularen zati batetik.

PCR - DNA anplifikatzeko oinarrizko metodoa

Polimerasaren kate-erreakzioa (PCR) oso zabaldua biologia molekularreko modernoetan erabiltzen da. Metodo hau, eta bertan, DNA molekula bakar baten kopiak (molekula zabalduz) kopuru handia lor daiteke.

PCR funtzio nagusiak:

- gaixotasunen diagnostikoa;

- DNA segmentu klonazioa, Gene.

Burutzeko polimerasaren kate erreakzioa honako elementu behar ditu: hasierako DNA molekula, termoegonkorrak DNA polimerasa bat (Taq edo Pompeu Fabra), deoxyribonucleotide fosfatoak (nitrogeno baseak iturriak), primers (2 primer 1 DNA molekula) eta bera buffer sistema horrek izan web erreakzioak guztiak.

denaturation, primer suberaketa eta luzapena: PCR hiru urrats ditu.

1. denaturation. 94-95 gradutan proshodit tenperaturan apurtu bi DNA kateak arteko hidrogeno-zubiak, eta ondorioz bakarreko lehorreratutako bi molekula lortuko dugu.

2. annealed primers. 50-60 gradu tenperaturan gradu Atxikitze primers bakarreko lehorreratutako azido nukleikoak molekula muturrak osagarritasuna motaren arabera gertatzen da.

3. luzapena. 72 gradu tenperaturan dago sintetizatu alaba bikoitza lehorreratutako azido deoxyribonucleic molekulak.

DNA sekuentziatzeko

Molecular biologikoaren ikerketa metodo askotan nukleotidoen sekuentzia ezagutza eskatzen azido deoxyribonucleic molekula batean. zehazteko kode genetikoa sekuentziatu. Etorkizuneko diagnostiko molekularra giza sekuentzia erabakitzeko, irabazitako ezagutza oinarrituko da.

Hurrengo sekuentziazioa motak:

• sekuentziazioaren Maxam-Gilbert bidez;
• Sanger sekuentziazioa:
• pyrosequencing;
• nanoporovoe sekuentziazioa.